โมโนโคลนัลแอนติบอดีต่ออสุจิ Y ของวัว

การคัดแยกเพศอสุจิของโคมีความสําคัญต่อวงการอุตสาหกรรม และปศุสัตว์เป็ นอยางมาก การ คัดแยกเพศอสุจิของโคนัน มีหลายกระบวนการทีนํามาใช้การใช้โมโนโคลนัลแอนติบอดีในการคัดแยกเพศของอสุจิเป็ นหนึงวิธีทีได้รับความนิยมเนืองจากการคัดแยกเพศด้วยวิธีนีจะไม่ส่งผลกระทบต่อคุณภาพของอสุจิเพศทีต้องการการศึกษาครังนีมีจุดประสงค์ทีจะผลิตโมโนโคลนัลแอนติบอดีทีมี ความจําเพาะต่ออสุจิเพศผู้ของโค โดยโมโนโคลนัลแอนติบอดีนีถูกสร้างขึนจากการฉีดกระตุ้นการสร้างแอนติบอดีในหนูขาวเพศเมียสายพันธุ์ BALC/c จํานวน 2 ตัว ด้วยอสุจิทีผานการแยกเพศเพศผู้ของโคหลังการกระบวนการเชือมเซลล์ได้เซลล์ลูกผสมมากกว่า 2000 โคโลนี จากนันนําเซลล์ลูกผสมทังหมดมาตรวจสอบความจําเพาะต่ออสุจิเพศผู้ของโคด้วยวิธี ELISA และ ตรวจสอบการจับของแอนติบอดีทีผิว ของอสุจิเพศผู้ของโค ซึงพบว่าเซลล์ลูกผสมโคลน G16G14, G16E7 และ G16E8 เป็ นเซลล์ลูกผสมทีสามารถผลิตโมโนโคลนัลแอนติบอดีทีมีความจําเพาะต่ออสุจิเพศผู้ของโคได้ จึงได้นําเซลล์ลูกผสมทังสามนีมาผลิตโมโนโลนัลแอนติบอดีเพือใช้ในการคัดแยกเพศของอสุจิโค ในขันตอนของการแยกเพศของอสุจิโคนันอสุจิเพศผู้ของโคทีโมโนโคลนัลแอนติบอดีจับจะถูกทําลายโดยการทํางานของคอมพลีเม็นต์ จากนันนําอสุจิทีผานการแยกเพศทีเหลือไปปั่นล้างแล้วไปปฏิสนธิในหลอดทดลองเพือตรวจสอบความถูกต้อง และความแม่นยําของกระบวนแยกเพศอสุจิโค ตัวอ่อนทีได้จากการปฏิสนธิในหลอดแกวจะถูกนําไปตรวจสอบเพศด้วยวิธีพีซีอาร์โดยใช้ไพร์เมอร์ทีมีความจําเพาะต่อโคเพศผู้และต่อโคผลจากการตรวจสอบเพศของตัวอ่อนทีได้จากการทดลองพบว่าเซลล์ลูกผสมทังสามสามารถผลิตแอนติบอดีทีมีความจําเพาะต่ออสุจิเพศผู้ของโคได้ โดยอสุจิทีได้ผานการคัดแยกเพศสามารถเพิ่มอัตราส่วนของตัวอ่อนเพศเมียได้ที 78.4, 74.4 และ 76 เปอร์เซ็นต์หลังจากปฏิสนธิในหลอดแล้วตามลําดับ<br><br>Bovine sperm sexing technology is important in industry and livestock sections. Various methods have been used for bovine sperm sexing. Immunological method is one of the favorable methods used, because this method does not affect the wanted sperm quality. This study aimed to produce monoclonal antibody (mAb) against bovine Y-sperm. The mAb were produced by stimulation of 2 female BALC/c mice by bovine Y-sperm. More than 2,000 hybridoma cells were grown after cells fusion. The cultured supernatant of the hybridoma cells were used to determine the specificity against bovine Y-sperm by ELISA and sperm surface binding method. It was found that 3 hybridoma cells, G16G14, G16E7 and G16E8 can produce mAb that are specific to bovine Y-sperm. These hybrid cells were used to produce mAb for sperm sexing. In the sperm sexing method, bovine Ysperms were destroyed via cytotoxicity using guinea pig complement. The undestroyed Xsperms were used in in vitro fertilization (IVF) to determine the accuracy and precision of the sperm sexing method using the produced mAb. The sexes of embryos obtained from the IVF were determined by polymerase chain reaction (PCR) method using bovine and bovine Y-specific primers. The embryos sex determination indicated that the 3 hybridoma cells can produce mAbs, which are specific to bovine Y-sperm. They can increase the ratio of female to 78.4, 74.4 and 76% after sperm sexing and IVF.